Определение времени свертывания цельной крови по Ли—Уайту.

В сухую мерную центрифужную пробирку путем венепункции самотеком набирают 1 мл крови и по секундомеру отмечают время полного свертывания крови, которое в норме равно 5—12 мин.

Тест спонтанного лизиса сгустка.

Если при выполнении предыдущего теста свертывание крови наступило, то пробирку помещают в термостат при температуре 37°С. Уменьшение образовавшегося сгустка на 1/2 или полный лизис в течение 15—20 мин свидетельствует о повышенной активности плазмина. При значительном снижении концентрации фибриногена или нарушении его биологической активности, а также при наличии антикоагулянтов (гепарин) свертывания крови не происходит.

Тромбин-тест [Федорова 3. Д., 1969].

Метод основан на определении скорости образования сгустка цельной крови или плазмы при внесении определенного количества тромбина.

Используют следующие реактивы: исследуемую кровь или плазму; тромбин-тест, содержащий 50 ЕД тромбина в 1 мл раствора (активность 7—11 с).

Перед употреблением тромбин-теста необходимо в ампулу, содержащую сухой стандартный тромбин, добавить 1 мл изотонического раствора хлорида натрия. Полученный раствор может быть использован для четырех определений в течение 8—12 ч.

Техника определения заключается в следующем. В пробирку, содержащую 0,2 мл раствора тромбин-теста, вносят 0,5 мл крови или цитратной плазмы, включают секундомер. В норме время образования сгустка составляет 7—11 с, что соответствует концентрации фибриногена 2—4 г/л.

Увеличение времени свертывания до 60 с, а также образование небольшого рыхлого сгустка свидетельствует о снижении концентрации фибриногена.

Отсутствие образования сгустка по истечении 3 мин свидетельствует о практически полном отсутствии способного к свертыванию фибриногена или наличии антикоагулянта (гепарин). Для исключения избытка гепарина или других антикоагулянтов применяют тест коррекции времени свертывания протамина сульфатом.

Тест иммунопреципитации и определение активности фибринолиза (А. И. Елизарова, 3. Д. Федорова и др.). Метод основан на выявлении ПДФ в сыворотке больного при реакции с антифибриногеновой сывороткой.

Используют следующие реактивы: антифибриногеновую сыворотку кролика; исследуемую сыворотку; 0,3% раствор фибриногена; сыворотку донора; изотонический раствор хлорида натрия.

Техника определения заключается в следующем. Исследуемую сыворотку из тромбин-теста в пробирке разводят изотоническим раствором хлорида натрия в соотношении 1:2, 1:4, 1:8. Затем по две капли каждого разведения сыворотки помещают в углубление на пластмассовой пластине или на чашку Петри и смешивают с равным количеством антифибриногеновой сыворотки. В течение 10—15 мин, осторожно покачивая пластину, следят за появлением флоккуляции, которая обычно выявляется в виде хлопьев или прециритата и лучше видна на темном фоне. При наличии продуктов деградации преципитат появляется уже через 10 мин. Параллельно проводят контрольное определение с сывороткой здорового человека и раствором фибриногена. Реакция происходит при комнатной температуре, ее считают положительной при наличии преципитации в любом из разведений.

Наряду с исследованием крови, взятой из вены, 'тромбин-тест; и тест иммунопреципитации следует определять с кровью, изливающейся из родовых путей, с раневых поверхностей и дренажей. Снижение концентрации фибриногена и наличие ПДФ в этих пробах свидетельствуют о наличии локального фибринолиза.

Коррекция времени свертывания протамина сульфатом. Метод заключается в уменьшении времени свертывания крови при ингибиции антикоагулянтов (гепарин) протамина сульфатом.

Используют следующие реактивы: исследуемую кровь или плазму; 1% раствор протамина сульфата; 0,277% раствор хлорида кальция.

Техника определения такова. К 1 мл исследуемой крови или ре- ■ кальцифицированной плазмы больной добавляют 0,2 мл 1% раствора протамина сульфата. При наличии избытка гепарина в , результате его нейтрализации время свертывания нормализуется.

Подсчет числа тромбоцитов. В меланжер набирают кровь до метки 0,5 и добавляют раствор цитрата натрия (3,8%) до метки 101. После 2-минутного встряхивания меланжера заполняют камеру Горяева и производят подсчет тромбоцитов в 5 больших квадратах (в одном большом квадрате 25 маленьких).

Тест фрагментации эритроцитов. В мазке эритроцитов выявляются обломки клеток, имеющих серповидную и звездчатую форму, а также шипообразные отростки. Эти изменения являются следствием повреждения эритроцитов фибрином в системе микроциркуляции.

Этаноловый тест. Метод основан на выявлении растворимых комплексов фибрин-мономеров с фибриногеном и продуктами деградации фибрина.

Ход исследования: к 0,5 мл плазмы добавляют 0,8 мл этанолборатного буфера, смесь слегка встряхивают и, поместив в .штатив при комнатной температуре, включают секундомер; через 10; 20 и 30 мин отмечают появление нитей фибрина или геля, т. е. оценивают, положителен ли тест. Положительный тест (+) указывает на присутствие в крови фибрин-мономеров и их комплексов с фибриногеном и ПДФ.

Тромбиновое время. Пробирку с 0,1 мл исследуемой цитратной плазмы и 0,05 мл изотонического раствора хлорида натрия подогревают на водяной бане (37°С) в течение 30 с. Затем добавляют 0,1 мл тромбина (30-секундного), одновременно включают секундомер и определяют время появления сгустка фибрина. В норме тромбиновое время составляет 24—34 с. Увеличение тромбинового времени свидетельствует о наличии в крови антикоагулянта (гепарин) или ПДФ.