Ученые используют проточную цитометрию для дифференциации различных типов клеток или микроскопических организмов. Это инструмент используемый в много применений как медицинские диагностики или судебнохимическая патология. Хотя этот экспериментальный метод довольно прост в выполнении, анализ сложных данных, полученных с помощью проточного цитометра, сложнее из-за множества экспериментальных факторов и/или параметров цитометра. Как таковой, по заведенному порядку для цитометрических данных, котор нужно визуализировать и проанализировать используя изощренные профессиональные программы как CELLQuest или FlowJo. Знакомство с методами проточной цитометрии, оборудованием и программным обеспечением необходимо для понимания результатов, полученных в результате этих экспериментов.

Уточните цель эксперимента, задав вопрос: "какой вопрос или гипотеза исследовались?"Это потребуется для корректировки исходных результатов в соответствующий формат и настройки для дальнейшего анализа с использованием программного обеспечения статистической цитометрии. Внесите любые изменения, необходимые для отображения данных с соответствующими настройками (например, положительные клетки, отрицательные ворота, интенсивность флуоресценции, популяции клеток и т. д.).).

Найдите Гейтса. Ячейки могут быть сгруппированы или просто сгруппированы на графике плотности или контурной диаграмме. Группы часто разделяются в зависимости от их идентичности. Если одна группа окрашивает очень интенсивно для конкретного маркера или антитела, делается вывод, что все члены этой группы имеют идентичность определенного типа клеток, который выражает этот маркер. Обычно можно найти ячейки, положительные для более чем одного из этих маркеров, и эти ячейки обычно являются промежуточными и обозначаются как "double-positive"."

Посмотрите на диаграммы рассеяния. То, как группы ячеек распределяются на диаграмме рассеяния, является показателем размера ячеек. Клетки с очень большим или большим разбросом обычно являются крупными клетками; тем не менее, они могут быть большими просто потому, что они содержат высокую долю цитоплазмы, или они могут быть большими, потому что они имеют очень большое ядро. В зависимости от изучаемой биологии, это, конечно, будет широко варьироваться между экспериментами.

Посмотри на цифры. Настройте графики для отображения различных параметров на одной оси (обычно на оси X), сохраняя при этом значения на оси Y. Это указывает на долю популяции образца, которая является положительной для этого конкретного параметра, поскольку пик обычно будет наблюдаться в положительно окрашенном образце, который будет отсутствовать в отрицательном контрольном образце.

Посмотрите на многопараметрические гистограммы. Регулируя ось X и ось Y, чтобы они представляли разные параметры, которые были исследованы в ходе эксперимента, можно получить более глубокое понимание свойств образца. Например, установив для оси X красную флуоресценцию и для оси Y зеленую флуоресценцию, для образца можно рассчитать затворы в стиле квадранта, чтобы показать четыре области квадранта, в которых присутствуют клетки, и окрашивать их в красный или зеленый цвет. флуоресценция, оба цвета или вообще нет. Это позволяет разделить гетерогенную выборку на составные части и визуализировать, а также количественно оценить любые перекрывающиеся объекты.